Neste estudo, analisamos a construção do humor nas tiras de Iotti, à luz da Teoria da Enunciação de Émile Benveniste. Nosso objetivo principal é descrever e analisar como o sentido do humor é construído, baseando-nos nos conceitos propostos na teoria que norteia essa pesquisa. Tomamos como ponto de partida para tal investigação as obras de Benveniste intituladas Problemas de linguística geral I e Problemas de linguística geral II (1966 – 1974, respectivamente). Segundo a proposta aqui formulada, a enunciação é da ordem do irrepetível, do singular, manifestada a cada vez que alguém diz “eu” a um “tu” em relação a “ele”. Assentados nesse contexto teórico, desenvolvemos a argumentação em torno da ideia de que o humor é fruto de uma construção derivada da situação de enunciação, entendida a partir do que Benveniste considera enunciação: “ato de tornar fala a língua” (FLORES; TEIXEIRA, 2008, p. 42). Além disso, partimos da noção de que “a referência é parte integrante da enunciação” (BENVENISTE, 2006c, p. 84) e de que é o locutor que a estabelece no ato de discurso. Como a referência – significação singular e irrepetível da língua – não pode ser prevista nem fixada, nossa hipótese é a de que o humor se realiza na situação de discurso –, que é definidora da referência. Para a realização deste estudo, analisamos duas tiras de Iotti (2010), selecionadas do site oficial do autor. Após a seleção do corpus, realizamos a análise de cada tira em duas etapas: 1) descrição dos elementos textuais da tira, 2) análise enunciativa da tira, considerando a relação enunciação e humor, com base nos três elementos que, segundo Benveniste (1970), constituem o quadro formal da enunciação: o ato de enunciação; a situação em que a enunciação se realiza e os instrumentos utilizados no uso da língua nas tiras analisadas. Por fim, procedemos à discussão das análises que apontam para a construção do sentido do humor na e pela enunciação, por meio da relação indissociável entre forma e sentido.